可見分光光度計(jì)樣品分析方法及操作指南

可見分光光度計(jì)樣品分析方法及操作指南

一、樣品分析方法

1. ?標(biāo)準(zhǔn)曲線法?

?標(biāo)準(zhǔn)溶液配制?：配制5-8個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度范圍需覆蓋待測(cè)樣品預(yù)期值），按梯度稀釋并貼標(biāo)防止混淆?。

?顯色處理?：部分樣品需加入顯色劑（如總磷檢測(cè)需鉬酸銨顯色）后靜置至反應(yīng)?。

?吸光度測(cè)定?：在特征吸收波長下（如總磷檢測(cè)用697nm）測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度，繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線?。

2. ?直接比較法?

?單點(diǎn)校準(zhǔn)?：適用于已知線性關(guān)系的樣品，用單一標(biāo)準(zhǔn)溶液計(jì)算樣品濃度（公式：

?樣=?樣?標(biāo)×?標(biāo)C 樣 = A 標(biāo)A 樣×C 標(biāo)）?。

二、操作流程

1. ?實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備?

?儀器檢查?：確認(rèn)分光光度計(jì)處于穩(wěn)定環(huán)境（溫度15-30℃，濕度≤70%），清潔樣品室及比色皿?。

?試劑準(zhǔn)備?：配制空白溶液（如蒸餾水或溶劑）及待測(cè)樣品，確保無懸浮物?。

2. ?儀器校準(zhǔn)與參數(shù)設(shè)置?

?開機(jī)預(yù)熱?：接通電源后預(yù)熱≥10分鐘（部分型號(hào)需30分鐘），避免基線漂移?。

?波長設(shè)定?：通過控制面板輸入特征波長（如總磷用697nm）或按<GOTO λ>鍵直接跳轉(zhuǎn)?。

?基線校正?：放入空白溶液，按<AUTO-ZERO>或<ABS%>鍵調(diào)零?。

3. ?樣品檢測(cè)?

?裝樣要求?：液體樣品需澄清（必要時(shí)過濾），裝入比色皿至3/4高度，外壁用擦鏡紙清潔?。

?測(cè)量步驟?：

將空白溶液放入光路，按<100%T>鍵調(diào)滿度?。

依次放入標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣品，記錄吸光度值（按<START/STOP>鍵讀數(shù)）?。

?重復(fù)測(cè)量?：每個(gè)樣品至少測(cè)3次，取平均值以提高精度?。

4. ?數(shù)據(jù)分析?

?標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合?：使用儀器軟件或手動(dòng)計(jì)算線性回歸方程（y=kx+b），計(jì)算樣品濃度?。

?結(jié)果驗(yàn)證?：通過加標(biāo)回收率或平行樣檢測(cè)驗(yàn)證數(shù)據(jù)可靠性?。

三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

?波長準(zhǔn)確性?：定期用標(biāo)準(zhǔn)濾光片（如鈥玻璃）校準(zhǔn)波長，誤差需≤±1nm?17。

?比色皿使用?：

玻璃比色皿僅適用于可見光區(qū)（350-1000nm），使用前后用乙醇清洗?。

避免用手直接接觸光面，防止指紋影響透光率?。

?干擾排除?：

渾濁樣品需離心或過濾，避免懸浮物散射光?。

共存物質(zhì)干擾可通過雙波長法或背景扣除消除?。

四、故障處理